蛋白表达(蛋白表达量的测定)
蛋白质表达系统的选择原则
常见的蛋白表达系统如下:重组蛋白原核表达 :通常使用带有标签的大肠杆菌和枯草杆菌两种表达体系。
表达需求:根据表达需求选择适当的表达系统。如果需要大量高纯度的蛋白,细菌表达系统通常是首选。如果需要进行正确的蛋白折叠和糖基化修饰,哺乳动物细胞表达系统可能更为合适。
蛋白表达系统多了去了,大致可以分为三类:1)原核表达系统:大肠杆菌;芽孢杆菌;链霉菌等。2)真核表达系统:昆虫;酵母;哺乳动物细胞(如CHO, 293细胞)等。
宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表达蛋白的种类也不相同。载体。载体的种类与宿主相匹配。
什么是蛋白质表达系统
编辑本段蛋白表达系统概述 蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成: 宿主。表达蛋白的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。
原核蛋白表达系统既是最常用的表达系统,也是最经济实惠的蛋白表达系统。
哺乳动物表达系统是一种常用的蛋白质表达系统,具有以下优点和缺点:哺乳动物细胞蛋白表达优点:真实的翻译后修饰:哺乳动物细胞能够提供与人类蛋白质翻译后修饰相近的修饰方式,例如蛋白质糖基化、磷酸化、甲基化等。
编辑本段蛋白表达系统概述蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成:宿主。表达蛋白的生物体。
蛋白表达怎么选择表达体系,各有什么优缺点?
常见的蛋白表达系统如下:重组蛋白原核表达 :通常使用带有标签的大肠杆菌和枯草杆菌两种表达体系。
原核的主要是指大肠杆菌表达系统了,优点就四个字,简单快捷,缺点也是蛮明显的:容易形成包涵体;折叠性差;很少的翻译后修饰;表达出来的蛋白可能没有活性。所以如果蛋白主要是用来做活性实验,建议还是用真核表达系统。
优点:克服大肠杆菌表达系统的不足,能繁殖快,高密度发酵,可以进行蛋白质翻译后的修饰合加工。缺点:缺乏强有力的受严格调控的启动子,分泌效率低,尤其是对于分子质量大于30KD的目的蛋白分子几乎不分泌。不适于高密度培养。
表达的蛋白质常形成不溶性的包涵体。真核表达体系的优点是可表达基因组DNA,表达的蛋白质可被适当修饰,因此表达产物直接就有功能;缺点是操作技术难、费时、不经济。
哺乳动物细胞表达系统:哺乳动物细胞(例如,CHO、HEK293)表达系统可以产生高质量、正确折叠的蛋白质,适用于研究和药物生产。这种系统的缺点包括相对高的成本和较低的表达水平。
成本低、抗污染能力强;表达量高、表达产物分离纯化相对简单、稳定性好;商品化的载体和菌株种类非常齐全、适用范围广等。缺点:可能会产生一些致热源(内毒素),并且大肠杆菌本身含有内毒素和有毒蛋白,可能混杂在终产物里。